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小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法
更新更新時間：2019-12-27 瀏覽次數(shù)：2215
平滑肌即無紋肌的通稱，平滑肌是由長紡錘形的單核細(xì)胞構(gòu)成。它不構(gòu)成獨(dú)立的器官，而只是成為構(gòu)成體壁和內(nèi)臟壁的因素（肌層）。平滑肌細(xì)胞互相連接，形成管狀結(jié)構(gòu)或中空器官；在功能上可以通過縮短和產(chǎn)生張力使器官發(fā)生運(yùn)動和變形，也可產(chǎn)生連續(xù)收縮或緊張性收縮，使器官對抗所加負(fù)荷而保持原有的形狀。
小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關(guān)．如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發(fā)病時，可以檢測到氣管平滑肌發(fā)生數(shù)目的增生和肥大，表型也發(fā)生改變，由收縮型轉(zhuǎn)為合成型與分泌型，并分泌多種與細(xì)胞因子；而且出現(xiàn)向氣管腔遷移的跡象。
小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動物正常支氣管組織，長梭狀細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。通過平滑肌肌動蛋白（α-SMA）免疫熒光染色鑒定為陽性，鑒定純度高于90%，不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
1.試驗(yàn)所需儀器設(shè)備及試劑
（1）儀器
儀器名稱 | 規(guī)格型號 | 廠家 |
生物安全柜 | BSC-1500ⅡA2-X | 濟(jì)南鑫貝西生物技術(shù)有限公司 |
CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱 | BC-J160S | 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司 |
熒光倒置顯微鏡 | DS-Ri2 | Nikon |
高速冷凍離心機(jī) | Multifuge X1R | Thermo Fisher |
電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 | DHG-9123A | 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司 |
（2）試劑耗材
試劑名稱 | 規(guī)格/貨號 | 廠家 |
T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 430639 | Coming |
血球計數(shù)板 | Neubauer improved | Marienfeld |
細(xì)胞培養(yǎng)孔板 | WHB-24 | 上海臥宏生物科技有限公司 |
平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 | PriMed-iCell-004 | 鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司 |
0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA） | 1734858 | Gibico |
2.小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)
1) 取4-5周齡的小鼠，斷頸處死后，泡于75%的酒精中，
2) 剖開胸腔，取出完整氣管及肺組織，放入無菌PBS中，
3) 在體視顯微鏡下，小心分離出下游支氣管，
4) 用眼科剪及鑷子分離肌層并剪碎，
5) 加入0.1% I + II + IV + dispase，4℃過夜消化，
6) 第二天置于37℃水浴搖床中消化2~3h，
7) 待液體變渾濁后加入*培養(yǎng)基終止消化，充分吹打，
8) 過100目篩網(wǎng)，收集濾液，1000rpm離心5min，棄去上清，
9) 用*培養(yǎng)基重懸沉淀，鋪瓶。
除了上述的細(xì)胞分離方法以外，鏡像綺點(diǎn)還有很多關(guān)于其他細(xì)胞的分離方法，想要學(xué)習(xí)的小伙伴可以來鏡像綺點(diǎn)進(jìn)行現(xiàn)場學(xué)習(xí)，如果想要其他原代分離培養(yǎng)方法，可在購買相應(yīng)的細(xì)胞過程中，贈送該細(xì)胞的分離方法及培養(yǎng)條件，想要了解更多，打電話或咨詢相關(guān)工作人員。