BEAS-2B 人支氣管上皮樣細胞/STR鑒定介紹

從一位非癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離出上皮細胞。這些細胞用腺病毒12-SV40病毒雜交病毒感染并克隆。 DEAS-2B細胞保留了對血清反應進行鱗關(guān)分化的能力，并有用于篩選誘導或影響分化及致癌的化學或生物制劑。細胞角蛋白及SV40抗原染色陽性。

細胞特性

1） 來源：人支氣管

2） 形態(tài)：上皮細胞樣

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系

細胞用途：僅供科研使用。

BEAS-2B 人支氣管上皮樣細胞/STR鑒定接收后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。

5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 上皮培養(yǎng)基（EpiCM）；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，5%；上皮生長因子，1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2ml*培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例；

1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1mlyi酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務介紹：

       一、原代細胞服務：
              各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
              多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
              原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
              原代細胞相關(guān)技術(shù)服務及整體實驗外包服務

       二、細胞系服務：
              細胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說明書
              細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導
              細胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長因子、試劑等

       三、iPS細胞服務：
              iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
              iPS細胞增殖及冷凍保存
              iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習
              新藥及實驗儀器上市前評估

       四、其他技術(shù)外包服務、客戶定制服務等

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